PRL-R Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422418-ACT

Il gene murino *Prlr* codifica il recettore della prolattina (PRL-R), un membro della superfamiglia dei recettori delle citochine che trasduce i segnali della prolattina per regolare lo sviluppo della ghiandola mammaria, l’allattamento, la fertilità, l’omeostasi metabolica e la modulazione immunitaria. In seguito al legame con il ligando, PRL-R attiva la segnalazione JAK2/STAT5 e coinvolge le vie PI3K/AKT e MAPK per controllare programmi trascrizionali che governano differenziamento cellulare, sopravvivenza e responsività endocrina. Alterazioni dell’attività di PRLR sono state associate a fenotipi riproduttivi e metabolici deregolati e a contesti di segnalazione proliferativa rilevanti per la biologia della mammella e per l’infiammazione. In quanto nodo che integra segnali endocrini con reti trascrizionali a valle, PRL-R è spesso oggetto di studio nelle ricerche sul crosstalk ormonale e sulla regolazione genica tessuto-specifica.

PRL-R Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Prlr senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRL-R Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Prlr nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Prlr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRL-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Prlr nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRL-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRL-R nelle cellule tumorali con espressione di Prlr silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.