PRL-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400814-ACT

PRLR codifica il recettore umano della prolattina (PRL‑R), un recettore per citochine di tipo I che media la segnalazione della prolattina regolando la differenziazione epiteliale, l’espressione dei geni lattogenici e l’omeostasi tissutale. La dimerizzazione del recettore dipendente dal ligando attiva JAK2/STAT5, nonché le vie PI3K–AKT e MAPK/ERK, integrando programmi trascrizionali e di sopravvivenza in diversi tipi cellulari sensibili agli ormoni. Una segnalazione PRL‑R deregolata è stata associata ad alterazioni della proliferazione, della differenziazione e del dialogo infiammatorio in molteplici tessuti, rendendo PRLR un nodo ampiamente studiato nella biologia guidata dagli ormoni. L’espressione di PRLR e l’output della via sono spesso analizzati in modelli di biologia della mammella e della prostata, di regolazione metabolica e di modulazione immunitaria, per chiarire dipendenze di segnalazione specifiche del contesto.

PRL-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRLR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRL-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRLR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRLR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRL-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRLR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRL-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRL-R nelle cellule tumorali con espressione di PRLR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.