PRIM2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422397

概要

Prim2 は、DNA 複製を開始するために先行鎖・遅延鎖の両方で必要となる RNA–DNA プライマーを合成する Pol α–プライマーゼ複合体に含まれる DNA プライマーゼの大型触媒サブユニット PRIM2A をコードします。PRIM2A は、複製起点の発火、岡崎フラグメントのプライミング、S 期全体の進行を支え、その機能はレプリソームの組み立てや DNA ポリメラーゼのスイッチングと緊密に連携しています。プライマーゼ活性が破綻すると、複製ストレスの増大、複製フォークの安定性低下、DNA 損傷応答およびチェックポイント経路への依存性の増加が起こると考えられます。PRIM2A は複製の中核因子として、ゲノム維持、細胞増殖制御、そして複製異常がゲノム不安定性関連疾患の病態に結び付く機構の研究に広く関わります。

PRIM2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrim2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prim2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prim2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PRIM2Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PRIM2Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prim2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PRIM2Aの機能に不可欠なPrim2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prim2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PRIM2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPRIM2A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prim2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PRIM2A HDRプラスミド（m）および PRIM2A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrim2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrim2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。