PRIC285 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406441-ACT

HELZ2 humano (também referido como PRIC285) codifica um coativador transcricional do tipo helicase que integra sinais de receptores hormonais nucleares e de outros fatores de transcrição para modular a expressão gênica dependente da RNA polimerase II. O PRIC285 tem sido associado à regulação de programas de metabolismo de lipídios e glicose por meio de interações com vias como a sinalização de PPAR, influenciando a homeostase energética celular e o tônus inflamatório. Ao moldar os resultados transcricionais em hepatócitos, adipócitos e em contextos relevantes ao sistema imune, a atividade de HELZ2 é estudada por sua contribuição para a desregulação metabólica e fenótipos complexos de doenças relacionadas. Sua função de coativador nuclear também o torna útil para dissecar o controle dependente de cromatina de redes gênicas induzíveis e da transcrição responsiva ao estresse.

PRIC285 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HELZ2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRIC285 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HELZ2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HELZ2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRIC285. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HELZ2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRIC285 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRIC285 em células tumorais com expressão de HELZ2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.