PPARα Plasmídeo duplo de Nickase (m2): sc-422360-NIC-2

O gene Ppara em camundongos codifica o receptor ativado por proliferadores de peroxissomos alfa (PPARα), um receptor nuclear ativado por ligante que forma heterodímeros com RXR para regular a transcrição por meio de elementos de resposta ao PPAR. O PPARα é um controlador central do catabolismo lipídico, coordenando a captação de ácidos graxos e os programas de β-oxidação em mitocôndrias e peroxissomos, além de integrar a sinalização metabólica e inflamatória em tecidos como fígado, coração e músculo. Alterações na atividade de Ppara estão associadas a dislipidemia, esteatose hepática, resistência à insulina e distúrbios inflamatórios, tornando-o um alvo fundamental para estudos mecanísticos da homeostase metabólica. A edição gênica de Ppara em camundongos permite a investigação funcional da sinalização de receptores nucleares, o mapeamento de redes transcricionais e o desenvolvimento de modelos in vivo ou baseados em células para estudar o metabolismo de lipídios e a comunicação cruzada imuno-metabólica.

PPARα O Plasmídeo de Nickase Dupla (m2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Ppara em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Ppara. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Ppara. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Ppara interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.