PP4R2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407439-ACT

PPP4R2は、プロテインホスファターゼ4（PP4）の調節サブユニット2（PP4R2）をコードしています。PP4R2はセリン／スレオニンホスファターゼ複合体の構成要素であり、PP4の触媒活性が特定の基質や細胞内プロセスに向かうよう制御する働きを担います。PP4R2関連PP4複合体は、チェックポイント活性化やクロマチン関連修復因子を調整する制御された脱リン酸化を介して、細胞周期の進行、中心体および紡錘体の制御、DNA損傷応答シグナル伝達に関与します。リン酸化ダイナミクスに影響することで、PPP4R2はゲノム安定性に関連するストレス応答経路や転写プログラムを調節し得ます。ホスファターゼシグナル伝達の破綻やDNA修復経路制御の障害は、がん生物学や他の増殖性疾患で繰り返し見られる特徴であり、PPP4R2はリン酸化依存的制御の機構研究において重要な対象となります。

PP4R2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP4R2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP4R2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP4R2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP4R2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP4R2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP4R2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP4R2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP4R2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP4R2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。