POMC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400592

Visão geral

POMC (proopiomelanocortina) codifica uma pro-hormona secretória que é processada proteoliticamente em múltiplos péptidos bioativos, incluindo a ACTH e hormonas estimuladoras de melanócitos, que coordenam a sinalização endócrina do stress, a homeostase energética, a pigmentação e a nociceção. Nos corticotrofos hipofisários, a ACTH derivada de POMC estimula a esteroidogénese adrenal através de vias dos recetores de melanocortina, ligando a atividade do eixo hipotálamo–hipófise–adrenal a respostas metabólicas e imunitárias sistémicas. O processamento de POMC depende do tráfego na via secretória regulada e de convertases de pro-hormonas, integrando-se com a sinalização cAMP/PKA e com programas de diferenciação neuroendócrina. A desregulação ou perda da função de POMC está associada a perturbações da função adrenal, fenótipos de obesidade e hiperfagia, e alteração da sinalização melanocortínica, com relevância para a investigação neuroendócrina e metabólica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO POMC (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene POMC em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do POMC, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do POMC na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína POMC.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de POMC para a investigação da sinalização de POMC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) POMC críticos para a função POMC
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos POMC para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo POMC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo POMC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus POMC. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo POMC Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR POMC (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia POMC para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo POMC definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.