Plasmide CRISPR/Cas9 KO POLDIP3 (h): sc-413603

Présentation

POLDIP3 (polymerase delta interacting protein 3), également connu sous le nom de SKAR, est une protéine liant l’ARN qui couple l’épissage des ARNm à la traduction et favorise la synthèse efficace des protéines nécessaires à la croissance cellulaire. Il agit en aval de la signalisation mTOR, où des interactions dépendantes de la phosphorylation aident à coordonner l’initiation de la traduction et le recrutement des ribosomes sur les transcrits épissés. POLDIP3 a également été associé à la régulation des voies de maintien du génome via des interactions avec des complexes d’ADN polymérase, intégrant les signaux prolifératifs à des processus liés à la réplication. Le dérèglement de ces réseaux de maturation de l’ARN et de contrôle de la croissance est pertinent pour les études de la transformation maligne, des réponses au stress cellulaire et des troubles prolifératifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO POLDIP3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène POLDIP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du POLDIP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert POLDIP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine POLDIP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en POLDIP3 pour l'étude de la signalisation de POLDIP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de POLDIP3 essentiels à la fonction de POLDIP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de POLDIP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le POLDIP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le POLDIP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus POLDIP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le POLDIP3 plasmide HDR (h) et le POLDIP3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie POLDIP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles POLDIP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.