POL H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-401794-KO-2

Visão geral

POLH codifica a DNA polimerase eta (Pol η), uma polimerase de síntese por translesão (TLS) da família Y que permite o desvio preciso de dímeros de pirimidina ciclobutano induzidos por UV durante a replicação do DNA. Ela atua na tolerância a danos no DNA e nas respostas ao estresse replicativo, coordenando-se com o antígeno nuclear de células em proliferação (PCNA) e com a troca dependente de ubiquitina das polimerases replicativas para polimerases TLS especializadas. A perda ou disfunção da Pol η compromete a estabilidade do genoma e aumenta a mutagênese induzida por UV, ligando POLH à variante do xeroderma pigmentoso (XP-V) e a mecanismos mais amplos de carcinogênese impulsionados por defeitos no reparo do DNA. Como POLH está na interseção entre o processamento de lesões associado ao reparo por excisão de nucleotídeos e a adaptação do checkpoint da fase S, é frequentemente estudado em vias que governam assinaturas mutacionais e a dinâmica das forquilhas de replicação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO POL H (h2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene POLH em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do POLH, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do POLH na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína POL H.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de POLH para a investigação da sinalização de POL H, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) POLH críticos para a função POL H
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos POLH para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo POL H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo POL H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus POLH. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo POL H Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR POL H (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia POLH para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo POLH definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.