PMS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418473-ACT

O PMS1 humano codifica um homólogo de MutL que participa no reparo de erros de pareamento do DNA (mismatch repair), sustentando a fidelidade da replicação ao coordenar o reconhecimento e o processamento de incompatibilidades base–base e de alças de inserção–deleção. O PMS1 atua na rede de complexos MutL para acoplar o reconhecimento do erro às etapas subsequentes de excisão e ressíntese, contribuindo para a estabilidade do genoma e para a supressão da mutagênese espontânea. Defeitos ou alterações na regulação de genes de reparo de erros de pareamento podem elevar a instabilidade de microssatélites e aumentar o acúmulo de mutações, processos amplamente relevantes para a carcinogênese e para respostas celulares ao estresse. Assim, o PMS1 é estudado em vias que governam a sinalização de dano ao DNA, o reparo associado à replicação e a manutenção da integridade cromossômica.

PMS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PMS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PMS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PMS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PMS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PMS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PMS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PMS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PMS1 em células tumorais com expressão de PMS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.