PLZF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400354-ACT

ZBTB16 codifica PLZF, un fattore di trascrizione a dita di zinco con dominio BTB/POZ che governa le decisioni sul destino cellulare coordinando programmi di repressione e attivazione trascrizionale associati alla cromatina. Nell’ematopoiesi umana e nello sviluppo del sistema immunitario, PLZF contribuisce a regolare il mantenimento dei progenitori e la specificazione di linea, includendo effetti sulla differenziazione dei linfociti “innate-like” e sull’espressione genica responsiva alle citochine. Le reti dipendenti da PLZF si intersecano con il controllo epigenetico della proliferazione e della differenziazione, collegando questo fattore alla regolazione dello sviluppo e ai percorsi di maturazione cellulare. Un’espressione disrégolata di ZBTB16/PLZF o riarrangiamenti sono stati associati a programmi trascrizionali alterati in contesti di malattie ematologiche, rendendolo un nodo utile per studiare fenotipi guidati da fattori di trascrizione.

PLZF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZBTB16 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PLZF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZBTB16 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZBTB16, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PLZF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZBTB16 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PLZF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PLZF nelle cellule tumorali con espressione di ZBTB16 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.