Plasmide Double Nickase (h) PLU-1: sc-403771-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PLU-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PLU-1 Double Nickase (h) et le plasmide PLU-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KDM5B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PLU-1 Antibody (7H3D7): sc-517291
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PLU-1 | sc-403771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PLU-1 | sc-403771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM5B code la déméthylase de lysine des histones PLU-1 (JARID1B), une déméthylase de H3K4me3/2 qui module les états de la chromatine au niveau des promoteurs et des enhancers afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant la progression du cycle cellulaire, la spécification de lignée et la différenciation. Par l’intermédiaire de son domaine catalytique JmjC et de régions d’interaction avec la chromatine, PLU-1 coordonne la répression épigénétique et interagit avec des régulateurs transcriptionnels pour façonner les profils d’expression génique. Une activité dérégulée de KDM5B a été associée à une prolifération altérée, au maintien de l’identité cellulaire et à une plasticité transcriptionnelle accrue dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud clé du contrôle épigénétique des voies oncogéniques et développementales. En tant qu’enzyme modifiant la chromatine, PLU-1 est fréquemment étudiée dans les mécanismes de mémoire transcriptionnelle, de remodelage de la chromatine couplé à la réplication et d’états cellulaires associés à la résistance.
PLU-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KDM5B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KDM5B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KDM5B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KDM5B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.