PLSCR1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402203-ACT

ヒトPLSCR1（phospholipid scramblase 1）は、インターフェロン誘導性の膜関連タンパク質であり、リン脂質の双方向性トランスロケーション、細胞膜リモデリング、ならびに細胞ストレス応答時における細胞表面ホスファチジルセリン露出の制御に関与するとされています。脂質動態にとどまらず、PLSCR1は自然免疫シグナル伝達や、インターフェロン／JAK–STAT経路下流の転写プログラムとも関連づけられており、抗ウイルス応答や細胞増殖制御に影響を与えます。PLSCR1の発現変化は複数の腫瘍環境や炎症状態で報告されており、膜構造の制御、サイトカインシグナル、免疫介在性表現型をつなぐ機序を研究するうえで有用な結節点となります。幅広い細胞内局在と経路ネットワーク上の結びつきから、シグナル伝達の解析、アポトーシス関連の膜変化の解明、宿主—病原体応答ネットワークの研究への応用が支持されます。

PLSCR1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLSCR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PLSCR1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLSCR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLSCR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PLSCR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLSCR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPLSCR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLSCR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPLSCR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。