PLSCR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402203-ACT

Humanes PLSCR1 (Phospholipid-Scramblase 1) ist ein interferoninduzierbares, membranassoziiertes Protein, dem eine Rolle bei der bidirektionalen Translokation von Phospholipiden, dem Remodeling der Plasmamembran und der Regulation der Exposition von Phosphatidylserin an der Zelloberfläche während zellulärer Stressantworten zugeschrieben wird. Über die Lipiddynamik hinaus wurde PLSCR1 mit der angeborenen Immun-Signalübertragung sowie mit Transkriptionsprogrammen nachgeschaltet an Interferon-/JAK–STAT-Signalwegen in Verbindung gebracht und beeinflusst damit antivirale Antworten und die Kontrolle des Zellwachstums. Eine veränderte PLSCR1-Expression wurde in verschiedenen Tumorkontexten und entzündlichen Zuständen berichtet, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Mechanismen macht, die Membranorganisation, Zytokin-Signalgebung und immunvermittelte Phänotypen verbinden. Seine breite subzelluläre Lokalisation und Vernetzung in Signalwegen unterstützen Anwendungen zur Analyse der Signaltransduktion, apoptoseassoziierter Membranveränderungen und von Wirt–Pathogen-Reaktionsnetzwerken.

PLSCR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLSCR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PLSCR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLSCR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLSCR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PLSCR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLSCR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PLSCR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PLSCR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLSCR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.