plexin-D1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405134-ACT

O PLXND1 humano codifica a plexina-D1, um receptor transmembranar de passagem única que medeia sinais de orientação dependentes de semaforinas para regular a migração celular, a remodelação do citoesqueleto e a padronização direcional. A sinalização da plexina-D1 integra-se com as GTPases da família Rho e com a dinâmica associada da actina para influenciar o comportamento endotelial, a brotação angiogênica e a morfogênese tecidual. A atividade do PLXND1 também está ligada a alterações dependentes do contexto na motilidade invasiva e em programas de remodelamento vascular, frequentemente estudados em biologia do câncer e em microambientes inflamatórios. Como resultado, a plexina-D1 é rotineiramente investigada como um nó que conecta vias de orientação com a comunicação célula–célula e as interações com a matriz extracelular.

plexin-D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLXND1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

plexin-D1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLXND1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLXND1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de plexin-D1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLXND1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de plexin-D1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via plexin-D1 em células tumorais com expressão de PLXND1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.