PLC γ1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400472-ACT

PLCG1 codifica a fosfolipase C gama 1 (PLCγ1), uma enzima de sinalização proximal ao receptor, ativada a jusante de receptores tirosina-quinase e de receptores imunes. Após a ativação, a PLCγ1 hidrolisa o PIP2 para gerar IP3 e DAG, desencadeando a mobilização intracelular de Ca2+ e a ativação de PKC, que coordenam programas transcricionais, remodelamento do citoesqueleto e migração celular. Esse nó de sinalização integra entradas de vias como EGFR/PDGFR/FGFR e a sinalização do receptor de células T, moldando respostas de proliferação e diferenciação. A atividade desregulada de PLCG1 e o redirecionamento dessas vias têm sido associados a sinalização aberrante por fatores de crescimento e a patologias relacionadas ao sistema imune, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos da transdução de sinal impulsionada por fosfoinositídeos.

PLC γ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLCG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PLC γ1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLCG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLCG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PLC γ1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLCG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PLC γ1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PLC γ1 em células tumorais com expressão de PLCG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.