PLC β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400984

概要

PLCB2はホスホリパーゼCβ2（PLCβ2）をコードしており、Gタンパク質共役受容体（GPCR）の下流で働く膜結合性エフェクターとして、PIP2を加水分解してIP3とDAGを産生し、細胞内Ca2+動員とPKC活性化を駆動します。このシグナル伝達軸は、走化性、脱顆粒、分泌、細胞骨格の再構築を制御し、特に造血系細胞系譜においては、PLCβ2が免疫細胞の活性化や炎症応答に寄与します。PLCβ2はGPCR–Gαq/11経路に組み込まれ、カルシウム依存的な転写プログラムおよび小胞輸送を協調的に制御します。PLCβ2に関連するシグナルの破綻は、白血球機能の異常や、血液疾患モデルにおける増殖性の表現型と関連づけられており、免疫やがん関連シグナル伝達ネットワークの観点から研究対象として重要です。

PLC β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLCB2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLCB2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLCB2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLC β2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PLC β2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLCB2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PLC β2の機能に不可欠なPLCB2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLCB2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PLC β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPLC β2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLCB2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PLC β2 HDRプラスミド（h）および PLC β2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLCB2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLCB2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。