PKA Iα reg Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422400

Panoramica

Prkar1a codifica la subunità regolatoria alfa di tipo I della proteina chinasi A (PKA) dipendente dal cAMP, un importante regolatore negativo che si lega alle subunità catalitiche e ne limita l’attività chinasicа finché il cAMP non induce la dissociazione dell’oloenzima. Attraverso il controllo della segnalazione PKA, PRKAR1A influenza programmi di fosforilazione che regolano metabolismo, progressione del ciclo cellulare, differenziamento e risposte trascrizionali a valle delle vie GPCR–adenilato ciclasi–cAMP. Nei sistemi murini, l’alterazione di Prkar1a modifica la dinamica della via cAMP/PKA con effetti a valle sull’espressione genica regolata da CREB e su un più ampio crosstalk tra vie di segnalazione, inclusi processi associati a MAPK. La disregolazione di PRKAR1A e della segnalazione cAMP/PKA è stata collegata a fenotipi endocrini e di controllo della crescita, rendendolo un bersaglio rilevante per studiare in vivo e in colture cellulari i meccanismi di malattia dipendenti dalla segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PKA Iα reg (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prkar1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prkar1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prkar1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PKA Iα reg.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prkar1a per lo studio della segnalazione di PKA Iα reg, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prkar1a critici per la funzione di PKA Iα reg
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prkar1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prkar1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PKA Iα reg Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PKA Iα reg (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prkar1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prkar1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.