PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422400

Übersicht

Prkar1a kodiert die regulatorische Unterheinheit Typ I alpha der cAMP-abhängigen Proteinkinase A (PKA), einen zentralen negativen Regulator, der an die katalytischen Untereinheiten bindet und die Kinaseaktivität hemmt, bis cAMP die Dissoziation des Holoenzyms auslöst. Über die Kontrolle der PKA-Signalübertragung beeinflusst PRKAR1A Phosphorylierungsprogramme, die Stoffwechsel, Zellzyklusprogression, Differenzierung und transkriptionelle Antworten nachgeschaltet an GPCR–Adenylatcyclase–cAMP-Signalwegen steuern. In Mausmodellen verändert eine Störung von Prkar1a die Dynamik des cAMP/PKA-Signalwegs mit nachgelagerten Effekten auf die CREB-regulierte Genexpression und auf weiterreichende Signalweg-Wechselwirkungen, einschließlich MAPK-assoziierter Prozesse. Eine Fehlregulation von PRKAR1A und der cAMP/PKA-Signalübertragung wurde mit endokrinen und wachstumsregulatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was PRKAR1A zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung signalabhängiger Krankheitsmechanismen in vivo und in kultivierten Zellen macht.

Das PKA Iα reg CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prkar1a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prkar1a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prkar1a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PKA Iα reg-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prkar1a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PKA Iα reg-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Prkar1a-Exone abzielen, die für die PKA Iα reg-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prkar1a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PKA Iα reg CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PKA Iα reg CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prkar1a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PKA Iα reg HDR-Plasmid (m) und PKA Iα reg HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prkar1a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prkar1a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.