PITHD1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412754
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PITHD1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PITHD1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PITHD1 Anticuerpo (A-10): sc-515392
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PITHD1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-412754 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PITHD1 codifica una proteína pequeña y conservada implicada en la proteostasis mediante interacciones con el proteasoma 26S, lo que la vincula al recambio regulado de proteínas y a la adaptación al estrés celular. Al modular procesos asociados al proteasoma, PITHD1 puede influir en la estabilidad de reguladores de señalización y del ciclo celular de vida corta, que determinan fenotipos de proliferación y supervivencia. Se ha descrito una expresión alterada de PITHD1 en estudios multi-ómicos en diversos contextos tumorales, lo que respalda su uso como diana de investigación para analizar dependencias del sistema ubiquitina–proteasoma. Por tanto, el estudio funcional de PITHD1 es relevante para vías que gobiernan el control de calidad proteica, las respuestas al estrés y la remodelación del transcriptoma/proteoma.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PITHD1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PITHD1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PITHD1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PITHD1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PITHD1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PITHD1 para la investigación de la señalización de PITHD1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PITHD1 críticos para la función de PITHD1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PITHD1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PITHD1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PITHD1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PITHD1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PITHD1 (h) y el plásmido HDR PITHD1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PITHD1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PITHD1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.