PISD CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404398

概要

PISDはホスファチジルセリン脱炭酸酵素をコードしており、これはミトコンドリア内膜に存在する酵素で、ホスファチジルセリンをホスファチジルエタノールアミン（PE）へと変換し、膜の新生、クリステ構造の維持、ならびにオルガネラの恒常性を支えています。PEプールを制御することで、PISDは脂質リモデリングやミトコンドリア動態を左右し、酸化的リン酸化やアポトーシスに関連する過程にも影響します。PISD依存的なリン脂質代謝の破綻は、ミトコンドリア機能障害やより広範な細胞ストレス応答の異常と結び付けられており、神経筋系および代謝系の表現型研究において重要です。また、ミトコンドリア脂質生合成における中心的役割は、オートファジーやER–ミトコンドリア間の脂質輸送を制御する経路とも交差します。

PISD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPISD遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PISD内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PISDのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PISDタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PISDシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PISD欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PISDの機能に不可欠なPISDエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PISDゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PISD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPISD CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PISD遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PISD HDRプラスミド（h）および PISD HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPISDホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPISD標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。