PIAS 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401406-ACT

PIAS3 (inibidor proteico do STAT3 ativado) é uma ligase E3 de SUMO que modula respostas transcricionais ao promover a SUMOilação de proteínas nucleares e ao inibir diretamente a atividade de ligação ao DNA do STAT3. Por meio da regulação da sinalização JAK/STAT e de um controle transcricional mais amplo dependente de SUMO sobre a atividade de fatores de transcrição, o PIAS3 influencia os desfechos da sinalização por citocinas, a progressão do ciclo celular e programas gênicos responsivos ao estresse. O PIAS3 tem sido associado a vias que governam a regulação imune e a sinalização oncogênica, nas quais alterações na atividade do STAT3 e na dinâmica de SUMOilação são frequentemente observadas. Estudar a função do PIAS3 ajuda a esclarecer como modificações pós-traducionais e repressão transcricional moldam estados de expressão gênica em contextos associados à inflamação e à proliferação.

PIAS 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIAS 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIAS 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIAS 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIAS 3 em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.