PI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406508

概要

PI4KAは、ホスファチジルイノシトール4-キナーゼα（PI 4-キナーゼα）をコードする遺伝子であり、膜のアイデンティティやシグナル伝達を組織化するホスホイノシチドの重要な前駆体であるホスファチジルイノシトール4-リン酸（PI4P）を産生する脂質キナーゼです。PI 4-キナーゼαは、ゴルジ体および形質膜におけるPI4Pプールを維持し、小胞輸送、ホスホイノシチド依存性シグナル伝達、ならびに細胞骨格ダイナミクスに影響を与えます。膜脂質恒常性への影響を介して、PI4KAは細胞ストレス応答やエンドメンブレン区画のリモデリングの研究に関連し、またホスホイノシチド代謝の変調は、神経発生やがん化過程を含む多様なヒト疾患メカニズムと関連づけられています。

PI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPI4KA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PI4KA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PI4KAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PI 4-kinase αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PI 4-kinase αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PI4KA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PI 4-kinase αの機能に不可欠なPI4KAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PI4KAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PI4KA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PI 4-kinase α HDRプラスミド（h）および PI 4-kinase α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPI4KAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPI4KA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。