Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PI 3-kinase p85β Double Nickase Plasmid (h): sc-401991-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PI 3-kinase p85β Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PI 3-kinase p85β Double-Nickase-Plasmid (h) und PI 3-kinase p85β Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PIK3R2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PI 3-kinase p85β: sc-515646
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PI 3-kinase p85β Double Nickase Plasmid (h) | sc-401991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p85β Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIK3R2 kodiert die regulatorische Untereinheit p85β der Phosphoinositid-3-Kinase (PI3K) der Klasse IA, die p110-katalytische Isoformen stabilisiert und moduliert und aktivierte Rezeptortyrosinkinasen sowie Adapterproteine an die nachgeschaltete PI3K–AKT–mTOR-Signalgebung koppelt. Über die Kontrolle der PIP3-Generierung beeinflusst die PI-3-Kinase-Untereinheit p85β Zellwachstum, Überleben, Stoffwechsel, Zytoskelettdynamik und vesikulären Transport und integriert Signale aus Insulin-/IGF- und Wachstumsfaktorwegen. Eine veränderte Regulation des PI3K-Signalwegs ist breit mit onkogener Signalgebung, Stoffwechselentgleisungen und der Funktion von Immunzellen assoziiert, was PIK3R2 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegverschaltungen und Feedback-Mechanismen macht. In der Forschung unterstützt die gezielte Perturbation von PIK3R2 mechanistische Studien zur Nutzung von PI3K-Isoformen, zur Signalstärke und -beendigung sowie zum Cross-Talk mit MAPK- und mTOR-Komplexen.
PI 3-kinase p85β Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PIK3R2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PIK3R2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PIK3R2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PIK3R2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.