PI 3-kinase p85β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401991-ACT

PIK3R2 codifica a subunidade reguladora p85β da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) de classe IA, um mediador central da sinalização por receptores tirosina-quinase e por insulina/IGF. Ao estabilizar e modular as isoformas catalíticas p110, a PI 3-quinase p85β ajuda a controlar a produção de PIP3 e a atividade a jusante da via AKT–mTOR, influenciando o crescimento celular, a sobrevivência, o metabolismo e a dinâmica do citoesqueleto. Alterações na regulação da via PI3K estão amplamente implicadas na biologia do câncer, no neurodesenvolvimento e na sinalização imune, tornando o PIK3R2 um nó-chave para dissecar o feedback da via e a amplitude do sinal. A expressão de PIK3R2 e suas interações regulatórias também são relevantes para estudos de sensibilidade à insulina, migração e sinalização de resposta ao estresse em células humanas.

PI 3-kinase p85β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIK3R2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PI 3-kinase p85β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIK3R2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIK3R2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PI 3-kinase p85β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIK3R2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PI 3-kinase p85β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PI 3-kinase p85β em células tumorais com expressão de PIK3R2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.