PI 3-kinase p85α Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400224-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PI 3-kinase p85αO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PI 3-kinase p85α (h) e o Plasmídeo Double Nickase PI 3-kinase p85α (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PIK3R1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PI 3-kinase p85α Anticorpo (B-9): sc-1637
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PI 3-kinase p85α Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400224-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p85α Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400224-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIK3R1 codifica a subunidade regulatória p85α da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) de classe IA, um adaptador-chave que estabiliza e recruta as subunidades catalíticas p110 para receptores tirosina-quinase ativados e para proteínas IRS. Ao acoplar a sinalização ascendente de fatores de crescimento à produção de PIP3, a PI3K p85α controla a via AKT–mTOR e vias relacionadas que regulam a sobrevivência celular, a proliferação, o metabolismo e a regulação por feedback da sinalização de insulina. A p85α também influencia a montagem de complexos de sinalização por meio da ligação a fosfotirosinas mediada por domínios SH2 e contribui para o crosstalk com MAPK e outras redes de resposta ao estresse. Alterações na função de PIK3R1 e a desregulação da via estão associadas a estados de sinalização oncogênicos e a fenótipos metabólicos, tornando-o um nó amplamente utilizado em estudos mecanísticos do controle da via PI3K.
PI 3-kinase p85α O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PIK3R1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PIK3R1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PIK3R1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PIK3R1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.