PI 3-kinase p110γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401043

Visão geral

PIK3CG codifica a subunidade catalítica p110γ da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) de classe IB, um mediador-chave da sinalização de fosfoinositídeos acionada por GPCRs em células hematopoiéticas e em outros tipos celulares. A PI3-quinase p110γ fosforila lipídios de fosfatidilinositol para gerar PIP3, promovendo programas de sobrevivência dependentes de AKT, remodelamento do citoesqueleto e quimiotaxia direcionada por meio de efetores a jusante, como PDK1, mTOR e reguladores de pequenas GTPases. Essa via integra sinais de receptores de quimiocinas, receptores do complemento e mediadores inflamatórios para controlar a ativação de leucócitos, a migração e o burst oxidativo. A desregulação da sinalização de PIK3CG tem sido implicada em respostas inflamatórias aberrantes e disfunção de células imunes, e também é estudada no contexto de interações tumor–sistema imune e de sinalização do microambiente.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p110γ (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PIK3CG em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PIK3CG, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PIK3CG na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PI 3-kinase p110γ.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PIK3CG para a investigação da sinalização de PI 3-kinase p110γ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PIK3CG críticos para a função PI 3-kinase p110γ
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PIK3CG para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PI 3-kinase p110γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PI 3-kinase p110γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PIK3CG. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PI 3-kinase p110γ Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PI 3-kinase p110γ (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PIK3CG para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PIK3CG definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.