Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PI 3-kinase p110α Plasmide Double Nickase (h): sc-416642-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PI 3-kinase p110α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PI 3-kinase p110α Double Nickase Plasmid (h) e il PI 3-kinase p110α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PIK3CA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PI 3-kinase p110α Antibody (E-7): sc-518070
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PI 3-kinase p110α Plasmide Double Nickase (h) | sc-416642-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI 3-kinase p110α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416642-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PIK3CA codifica la subunità catalitica p110α della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe I, che fosforila il PIP2 per generare PIP3 sulla membrana plasmatica. Questo evento di segnalazione lipidica recluta e attiva AKT e gli effettori a valle, incluso mTOR, coordinando il controllo—indotto dai fattori di crescita—di proliferazione, metabolismo, sopravvivenza e dinamica del citoscheletro. La segnalazione PI3K/AKT/mTOR interagisce con i recettori tirosin-chinasici, RAS e circuiti di feedback che modulano le risposte cellulari allo stress e il sensing dei nutrienti. L’alterazione dell’attività di PIK3CA è frequentemente studiata in contesti di reti di segnalazione deregolate alla base della trasformazione oncogena, dell’uso alterato del glucosio e della migrazione cellulare aberrante.
PI 3-kinase p110α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PIK3CA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PIK3CA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PIK3CA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PIK3CA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.