PI 3-kinase p100 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432531

Visão geral

Pik3c3 codifica a subunidade catalítica da fosfatidilinositol 3-quinase de classe III (frequentemente referida como PI 3-quinase p100/Vps34), que gera fosfatidilinositol 3-fosfato para controlar a identidade e o tráfego das membranas endossomais. Em células de camundongo, a produção de PI3P por essa quinase é central para o início da autofagia, a maturação de endossomos em lisossomos e a triagem vesicular por meio de complexos com parceiros regulatórios como VPS15 e Beclin 1. A atividade de Pik3c3 integra sinais de nutrientes e de estresse para coordenar a homeostase lisossomal e o controle de qualidade celular, influenciando processos como proteostase, renovação mitocondrial e sinalização imune. Vias endolisossomais e de autofagia desreguladas, ligadas à função de Pik3c3, são frequentemente estudadas nos contextos de neurodegeneração, biologia de infecções e metabolismo de células tumorais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p100 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pik3c3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pik3c3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pik3c3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PI 3-kinase p100.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pik3c3 para a investigação da sinalização de PI 3-kinase p100, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pik3c3 críticos para a função PI 3-kinase p100
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pik3c3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PI 3-kinase p100 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PI 3-kinase p100 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pik3c3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PI 3-kinase p100 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PI 3-kinase p100 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pik3c3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pik3c3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.