The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
PHLPPL双切口酶质粒(m): sc-434083-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PHLPPL 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- PHLPPL双切酶质粒（m）和PHLPPL双切酶质粒（m2）编码针对Phlpp2的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PHLPPL双切口酶质粒(m) | sc-434083-NIC | 20 µg | $410.00 |
Phlpp2 编码 PHLPPL，这是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶，可去磷酸化包括 AKT 在内的关键信号节点，从而在小鼠细胞中调节 PI3K–AKT 通路的信号强度、细胞存活以及代谢稳态。通过对抗激酶驱动的磷酸化作用，PHLPPL 影响细胞增殖、应激反应和与胰岛素相关的信号输出，并可塑造下游由 mTOR 和 FOXO 调控的转录程序。实验模型中，PHLPP 家族活性的改变与生长失衡和代谢异常表型相关，因此 Phlpp2 是研究在致癌或代谢应激背景下信号通路重塑的有用靶点。
PHLPPL 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Phlpp2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Phlpp2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Phlpp2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Phlpp2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。