PHF5A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407986

Descripción general

PHF5A (proteína 5A con dedo PHD) es un componente esencial del subcomplejo SF3b dentro de la snRNP U2, donde facilita el reconocimiento de las secuencias del punto de ramificación y ayuda a determinar la elección del sitio de empalme durante el splicing del pre-ARNm. A través de su papel en el ensamblaje del espliceosoma y en su dinámica, PHF5A influye en la diversidad de isoformas de transcritos y garantiza programas de expresión génica eficientes vinculados a la progresión del ciclo celular y al mantenimiento del genoma. La alteración de la función de PHF5A puede provocar defectos generalizados de splicing, incluidos el uso aberrante de exones y la retención de intrones, lo que remodela la proteostasis y las vías de respuesta al estrés. Los componentes del espliceosoma desregulados, incluido PHF5A, se estudian con frecuencia en el contexto de cánceres y otros trastornos caracterizados por un procesamiento de ARN alterado y una adaptación transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PHF5A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PHF5A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PHF5A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PHF5A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PHF5A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PHF5A para la investigación de la señalización de PHF5A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PHF5A críticos para la función de PHF5A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PHF5A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PHF5A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PHF5A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PHF5A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PHF5A (h) y el plásmido HDR PHF5A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PHF5A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PHF5A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.