PHF19 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408215-ACT

PHF19 (proteina con dito PHD 19) è un regolatore associato alla cromatina che interagisce con il complesso repressivo Polycomb 2 (PRC2) per modulare la deposizione di H3K27me3 e mantenere programmi di repressione trascrizionale. Attraverso le sue funzioni di “lettore” epigenetico e di reclutamento, PHF19 contribuisce al controllo dell’identità cellulare, della proliferazione e della differenziazione, plasmando l’accessibilità della cromatina e gli stati di espressione genica. La deregolazione dell’espressione di PHF19 o delle vie della cromatina collegate a PRC2 è implicata in programmi trascrizionali oncogeni e in un’alterata scelta di destino di linea in molteplici contesti tumorali. In quanto nodo del silenziamento mediato da Polycomb, PHF19 è spesso studiata per il suo impatto sulle reti geniche dello sviluppo, sul rimodellamento della cromatina e sulla plasticità trascrizionale.

PHF19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PHF19 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PHF19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PHF19 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PHF19, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PHF19. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PHF19 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PHF19 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PHF19 nelle cellule tumorali con espressione di PHF19 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.