Per1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401260-ACT

Das menschliche Gen **PER1** kodiert den zirkadianen Period-Regulator 1 (Per1), einen zentralen Bestandteil der molekularen Uhr, die über transkriptionell‑translationelle Rückkopplungsschleifen Rhythmen von nahezu 24 Stunden erzeugt. Per1 beteiligt sich an der zirkadianen Regulation der Genexpression in Signalwegen, die den Zellzyklus, DNA-Schadensantworten, den Stoffwechsel und endokrine Signalübertragung steuern, und ist dabei mit der CLOCK/ARNTL‑gesteuerten Transkription sowie der CRY‑vermittelten Repression verknüpft. Eine veränderte PER1-Expression oder -Rhythmik wurde mit Störungen des zirkadianen Rhythmus in Verbindung gebracht und in Studien zur Tumorbiologie, zu stimmungsbezogenen Phänotypen und zu metabolischer Dysregulation beschrieben, was die weitreichenden Effekte auf zelluläre Zeitsteuerungsmechanismen widerspiegelt. Da PER1 Umweltreize mit nachgeschalteten Transkriptionsprogrammen koppelt, wird es häufig genutzt, um uhrgesteuerte Netzwerke und tageszeitabhängige zelluläre Phänotypen zu untersuchen.

Per1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PER1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Per1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PER1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PER1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Per1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PER1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Per1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Per1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PER1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.