PELP1 Plasmide Double Nickase (m): sc-429042-NIC

PELP1 (proteina 1 ricca di prolina, acido glutammico e leucina) è un coregolatore dei recettori nucleari e una proteina di impalcatura che integra, nelle cellule di topo, la segnalazione del recettore degli estrogeni e di altri recettori steroidei con il rimodellamento della cromatina e il controllo trascrizionale. Coordina le interazioni con modificatori epigenetici e complessi trascrizionali, influenzando la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e programmi legati alla biogenesi dei ribosomi. PELP1 è stata collegata a vie quali la segnalazione ERα/SRC, il crosstalk MAPK e PI3K/AKT e la regolazione di programmi di espressione genica che modellano proliferazione e differenziamento. Un’attività e una localizzazione deregolate di PELP1 sono state associate ad alterazioni della segnalazione ormonale e a reti trascrizionali oncogeniche in modelli di biologia del cancro, a supporto di studi meccanicistici di fenotipi guidati dai recettori nucleari.

PELP1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pelp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pelp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pelp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pelp1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.