Plásmido CRISPR de Activación (m) Peg10: sc-431278-ACT

Peg10 de ratón (gen expresado a partir del alelo paterno 10) codifica una proteína domesticada derivada de un retrotransposón, con características similares a Gag y Pol, que favorece la supervivencia celular, la proliferación y la diferenciación específica de linaje. Peg10 está regulado por impronta genómica y contribuye a programas del desarrollo, incluido el crecimiento placentario y embrionario, mediante el control transcripcional y postranscripcional de la expresión génica. A nivel celular, Peg10 se ha asociado con vías que regulan la resistencia a la apoptosis y la proteostasis, y su desregulación se estudia con frecuencia en el contexto de la transformación oncogénica, la remodelación tisular y señales de crecimiento aberrantes. Estas propiedades convierten a Peg10 en una diana relevante para investigar redes de genes improntados, biología del desarrollo y cambios asociados a enfermedad en los circuitos de regulación génica.

Peg10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Peg10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Peg10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Peg10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Peg10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Peg10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Peg10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Peg10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Peg10 en células tumorales con expresión de Peg10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.