Peg1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421634-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Peg1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Peg1ダブルニカースプラスミド（m）およびPeg1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Mestを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Peg1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421634-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスのMest（別名Peg1）は刷り込み遺伝子であり、膜関連タンパク質をコードする。胚および胎盤の発生、脂肪細胞分化、ならびに成長制御への関与が示唆されている。Peg1/MESTの機能は、親由来特異的な発現や刷り込み制御領域におけるDNAメチル化など、エピジェネティックな制御機構と関連づけられており、これらは発生過程の転写プログラムに影響を与える。Mest/MESTの発現量や刷り込み状態の変化は、胎児発育異常、胎盤機能不全、脂肪量の変化などの代謝表現型と関連することが報告されている。がん生物学の分野では、MESTの制御異常が腫瘍関連のエピジェネティック再プログラミングの特徴として報告されており、刷り込み、発生経路、細胞状態遷移の研究において重要な対象となる。
Peg1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Mest 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Mest内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Mestの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Mestが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。