PDE2A Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401957-LAC

O gene humano PDE2A codifica a fosfodiesterase 2A, uma fosfodiesterase de nucleotídeos cíclicos de duplo substrato que hidrolisa tanto o cAMP quanto o cGMP, moldando assim a amplitude e a compartimentalização de segundos mensageiros. A PDE2A é estimulada pela ligação de cGMP ao seu domínio regulatório GAF, possibilitando a comunicação cruzada de cGMP para cAMP que influencia a sinalização de PKA/PKG, a atividade de canais iônicos e respostas transcricionais dependentes de fosforilação. Por meio do controle da sinalização por nucleotídeos cíclicos, a PDE2A contribui para a excitabilidade neuronal e a plasticidade sináptica, bem como para programas de sinalização cardiovasculares e inflamatórios. Alterações na expressão ou na atividade de PDE2A têm sido associadas à biologia de doenças neuropsiquiátricas e neurodegenerativas e à desregulação da sinalização cardiometabólica, sustentando sua utilidade como um nó de via para pesquisas mecanísticas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PDE2A (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PDE2A numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PDE2A (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PDE2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PDE2A. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PDE2A e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.