PDCD1LG2/PD-L2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425483-ACT

Pdcd1lg2 codifica PDCD1LG2/PD-L2, un ligando di checkpoint immunitario espresso sulle cellule presentanti l’antigene e inducibile su alcuni tipi di cellule stromali e associate al tumore, che interagisce con PD-1 sui linfociti T attivati. La segnalazione PD-L2–PD-1 attenua l’attivazione guidata dal TCR, la produzione di citochine e la proliferazione tramite il reclutamento di fosfatasi inibitorie e la conseguente riduzione dell’attività delle vie PI3K–AKT e MAPK, contribuendo a definire la tolleranza periferica e la soglia delle risposte infiammatorie. Nei modelli murini, la regolazione di Pdcd1lg2 contribuisce al controllo dell’esaurimento dei linfociti T, della polarizzazione Th1/Th2 e del privilegio immunitario locale all’interno dei tessuti. L’espressione deregolata di PD-L2 viene studiata in contesti quali infezioni croniche, autoimmunità, immunobiologia dei trapianti ed evasione immunitaria nel microambiente tumorale, come biomarcatore meccanicistico di immunosoppressione.

PDCD1LG2/PD-L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Pdcd1lg2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PDCD1LG2/PD-L2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Pdcd1lg2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Pdcd1lg2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PDCD1LG2/PD-L2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Pdcd1lg2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PDCD1LG2/PD-L2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PDCD1LG2/PD-L2 nelle cellule tumorali con espressione di Pdcd1lg2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.