PD-ECGF Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403836-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PD-ECGFO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PD-ECGF (h) e o Plasmídeo Double Nickase PD-ECGF (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para TYMP. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PD-ECGF Anticorpo (PGF-44C): sc-47702
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PD-ECGF Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PD-ECGF Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O TYMP humano codifica a timidina fosforilase, também conhecida como fator de crescimento de células endoteliais derivado de plaquetas (PD-ECGF), uma enzima citosólica que catalisa a fosforólise da timidina e da desoxiuridina em timina/uracilo e 2-desoxirribose-1-fosfato, moldando assim a via de salvamento de nucleotídeos e o equilíbrio intracelular de dNTPs. Ao influenciar a disponibilidade de nucleosídeos e o metabolismo de fosfatos de desoxirribose, o PD-ECGF conecta o catabolismo de pirimidinas às respostas ao estresse de replicação do DNA, à homeostase de nucleotídeos mitocondriais e a programas celulares sensíveis ao estado redox. A alteração da atividade de TYMP está implicada na patobiologia da encefalomiopatia neurogastrointestinal mitocondrial (MNGIE) e tem sido estudada em contextos em que o metabolismo de nucleosídeos se cruza com a sinalização angiogênica e a adaptação do microambiente tumoral. Essas características tornam o TYMP um alvo útil para estudos mecanísticos do fluxo de nucleosídeos, da estabilidade genômica e de fenótipos associados ao metabolismo em células humanas.
PD-ECGF O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TYMP em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TYMP. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TYMP. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TYMP interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.