PCMT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418153-NIC

PCMT1は、タンパク質L-イソアスパラギン酸（D-アスパラギン酸）O-メチルトランスフェラーゼ1をコードしており、SAM依存性の修復酵素として機能します。この酵素は、アスパラギンやアスパラギン酸が自発的に脱アミド化あるいは異性化することで生じる異常なイソアスパルチル残基をメチル化します。このタンパク質品質管理活性は、損傷残基を正常なアスパラギン酸に近い状態へ戻す変換を促進し、加齢に伴う機能不全タンパク質の蓄積を抑えることで、プロテオスタシスの維持を支えます。PCMT1の機能は、細胞ストレス応答、タンパク質分解・代謝回転、ならびに酸化・代謝ストレス下における酵素や細胞骨格タンパク質の完全性維持と関わっています。PCMT1活性の変化は、神経細胞の脆弱性やタンパク質損傷に関連する表現型に関与すると示唆されており、神経生物学、老化、ストレス適応機構の研究において重要です。

PCMT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PCMT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PCMT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PCMT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PCMT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。