Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-426270-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PB1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PB1 Double Nickase Plasmid (m) e il PB1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pbrm1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PB1 Antibody (D-8): sc-390095
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PB1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-426270-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PB1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-426270-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Pbrm1* codifica PB1 (noto anche come PBRM1/BAF180), una subunità caratteristica del complesso di rimodellamento della cromatina PBAF SWI/SNF, che riconosce gli istoni acetilati tramite molteplici bromodomini e contribuisce a posizionare i nucleosomi per regolare la trascrizione. PB1 influenza la comunicazione tra enhancer e promotore, le risposte al danno del DNA e i programmi di differenziamento specifici di linea coordinando l’accessibilità della cromatina con il legame dei fattori di trascrizione. La perdita o l’alterazione di *Pbrm1* compromette il controllo epigenetico delle reti del ciclo cellulare e della risposta allo stress ed è spesso studiata nel contesto della biologia dei geni oncosoppressori, della stabilità genomica e della segnalazione infiammatoria. Nei modelli murini, *Pbrm1* è ampiamente utilizzato per analizzare come i rimodellatori della cromatina modellino i microambienti immunitari, l’adattamento metabolico e i fenotipi dello sviluppo.
PB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pbrm1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pbrm1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pbrm1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pbrm1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.