patched/PTCH1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400457-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- patched/PTCH1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase patched/PTCH1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase patched/PTCH1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PTCH1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:patched/PTCH1 Anticorpo (A-2): sc-518044
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
patched/PTCH1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
patched/PTCH1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTCH1 codifica o recetor humano patched, uma proteína transmembranar com 12 passagens que atua como o principal componente de ligação ao ligando e de inibição da via de sinalização Hedgehog. Na ausência de ligandos Hedgehog, o PTCH1 suprime a atividade de SMO para conter programas de transcrição dependentes de GLI que controlam o padrão embrionário, o comportamento de células estaminais/progenitoras e a homeostase dos tecidos. A atividade do PTCH1 está intimamente ligada ao tráfego ciliar e à transdução de sinal no cílio primário, integrando sinais do desenvolvimento com estados do ciclo celular e de diferenciação. Perturbações genéticas e regulatórias de PTCH1 estão associadas a uma saída desregulada da via Hedgehog e são amplamente estudadas em doenças do desenvolvimento e na biologia tumoral impulsionada por Hedgehog.
patched/PTCH1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PTCH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PTCH1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PTCH1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PTCH1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.