patched 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404866

概要

PTCH2はpatched 2をコードしており、12回膜貫通型の受容体として、Hedgehogリガンドに結合してSmoothenedの活性を調節することで、Hedgehogシグナル伝達の主要な負の制御因子として機能します。GLI依存性転写の制御を通じて、PTCH2は発生パターン形成、細胞運命決定、組織恒常性に寄与し、その作用は増殖、分化、線毛形成（ciliogenesis）などの過程とも交差します。Hedgehog経路シグナルの異常制御やPTCH2機能の変化は、腫瘍化に関わるシグナル環境や先天性／発生性の表現型と関連づけられており、経路に焦点を当てた機構研究における重要性を裏づけています。さらにPTCH2は、シグナルの振幅と持続時間を調整する受容体トラフィッキングやフィードバック制御との関連でも研究されています。

patched 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTCH2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTCH2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTCH2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、patched 2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、patched 2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTCH2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• patched 2の機能に不可欠なPTCH2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTCH2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• patched 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびpatched 2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTCH2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  patched 2 HDRプラスミド（h）および patched 2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTCH2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTCH2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。