PARD6B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401699-ACT

ヒトPARD6BはPar-6βをコードしており、PDZドメインをもつ極性スキャフォールドとして、PAR3および非定型PKCとともにPAR極性複合体を組み立て、頂端‐基底極性の確立とタイトジャンクション形成の協調に関与します。PARD6BはCDC42やRAC1などの低分子量GTPアーゼとの相互作用を介して、細胞骨格ダイナミクス、有向性細胞分裂、上皮形態形成の制御を助け、その下流で細胞移動や組織構築にも影響します。PARD6Bを含む極性シグナルの異常は、がんに関連する状況において上皮構造の破綻や浸潤性表現型と関連づけられており、発生過程やバリア機能の研究でも対象となっています。細胞間接着部位におけるシグナル伝達のハブとして、PARD6Bは極性依存的な転写プログラムおよび表現型プログラムを解析するための取り組みやすい足がかりを提供します。

PARD6B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PARD6Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PARD6B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PARD6B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPARD6B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PARD6Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPARD6B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPARD6B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPARD6B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPARD6B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。