PAR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-420265-KO-2

Visão geral

F2rl1 codifica o receptor ativado por proteases-2 (PAR-2), um receptor acoplado à proteína G ativado pela clivagem por proteases de serina, que expõe um ligante ancorado e inicia a sinalização pelas vias Gq/11, Gi/o e G12/13. A estimulação do PAR-2 mobiliza Ca2+ intracelular, ativa as cascatas MAPK/ERK e NF-κB e promove programas transcricionais associados à produção de citocinas, à regulação de barreiras e à sensibilização nociceptiva. Em tecidos de camundongo, o PAR-2 é amplamente expresso em compartimentos epiteliais e endoteliais, em células imunes e em neurônios sensoriais, onde coordena respostas inflamatórias e de remodelação tecidual. A atividade desregulada do PAR-2 tem sido implicada em modelos de inflamação das vias aéreas e intestinal, dermatite, dor e sinalização no microambiente tumoral, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos da biologia impulsionada por proteases.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAR-2 (m2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene F2rl1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do F2rl1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do F2rl1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAR-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de F2rl1 para a investigação da sinalização de PAR-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) F2rl1 críticos para a função PAR-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos F2rl1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PAR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PAR-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus F2rl1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PAR-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PAR-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia F2rl1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo F2rl1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.