PAPD5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412997-ACT

O PAPD5 humano codifica uma polimerase poli(A) não canónica (também conhecida como TENT4B) que reside principalmente no núcleo e participa na regulação génica pós-transcricional através do “tailing” de RNA. O PAPD5 coopera com as maquinarias de vigilância e degradação de RNA para influenciar a estabilidade do RNA e o controlo de qualidade, moldando a homeostase do transcriptoma e afetando processos como respostas ao stress e diferenciação. Ao modular o destino do RNA, o PAPD5 interage com vias mais amplas que regem a robustez da expressão génica, incluindo a biogénese de ribonucleoproteínas e o turnover nuclear de RNA. A atividade desregulada de PAPD5 tem sido associada na literatura a fenótipos de metabolismo de RNA alterado relevantes para a biologia do cancro e para doenças hereditárias envolvendo processamento aberrante de RNA.

PAPD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAPD5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PAPD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAPD5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAPD5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PAPD5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAPD5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PAPD5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PAPD5 em células tumorais com expressão de PAPD5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.