PAM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422110

Visão geral

A mono-oxigenase alfa-amidadora de peptidilglicina (PAM), codificada pelo gene Pam do camundongo, é uma enzima bifuncional que catalisa a amidação na extremidade C-terminal de muitos neuropeptídeos e hormônios peptídicos, uma modificação necessária para a plena bioatividade. Essa via dependente de cobre e ascorbato sustenta a maturação de peptídeos na via secretória e influencia a secreção regulada em células neuroendócrinas e neurônios. A atividade de Pam conecta a biogênese de vesículas e a função de grânulos secretórios a redes de sinalização de neuropeptídeos que modulam a transmissão sináptica, respostas ao estresse, metabolismo e a homeostase cardiovascular. A amidação peptídica desregulada e alterações na função de PAM têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, desequilíbrio endócrino e características cardiometabólicas, tornando Pam um locus útil para estudos mecanísticos da biologia da via secretória.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAM (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pam em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pam, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pam na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAM.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pam para a investigação da sinalização de PAM, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pam críticos para a função PAM
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pam para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PAM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PAM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pam. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PAM Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PAM (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pam para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pam definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.