PAK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404073

概要

PAK5（p21-activated kinase 5）は、Cdc42やRacなどのRhoファミリーGTPアーゼの下流で活性化されるセリン／スレオニンキナーゼであり、細胞骨格リモデリング、神経突起伸長、細胞生存を制御するシグナルを統合します。PAK5はミトコンドリアをはじめとする細胞内の各区画に局在し、アポトーシス関連シグナル伝達やストレス応答に影響を与え得ます。PAK5は、細胞骨格因子やシグナル伝達中間体のリン酸化を介して細胞運動性や極性を制御する経路に関与し、細胞外の刺激を接着や遊走の変化へと結び付けます。PAK5の活性や発現の破綻は、複数のがんにおいて異常な増殖、浸潤、治療抵抗性といった表現型と関連していることが報告されており、また神経発生やシナプス機能における役割から神経生物学的にも重要です。

PAK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPAK5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PAK5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PAK5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAK5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAK5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PAK5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAK5の機能に不可欠なPAK5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PAK5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPAK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PAK5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAK5 HDRプラスミド（h）および PAK5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPAK5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPAK5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。