Plasmide CRISPR/Cas9 KO PAFAH1B3 (m): sc-422104

Présentation

Pafah1b3 code la sous-unité catalytique PAFAH1B3, une phospholipase dépendante de la sérine qui hydrolyse le facteur d’activation plaquettaire et des phospholipides bioactifs apparentés. En modulant des seconds messagers lipidiques, PAFAH1B3 contribue à l’homéostasie membranaire et influence en aval la signalisation inflammatoire, les réponses au stress et les voies de remodelage métabolique. Une activité altérée de PAFAH1B3 a été associée à des modifications de la composition lipidique cellulaire et à des programmes liés à la prolifération, ce qui étaye sa pertinence dans l’étude du métabolisme des cellules cancéreuses et de la régulation immunitaire. Dans des modèles murins, Pafah1b3 constitue un point d’entrée pratique pour étudier le catabolisme des phospholipides et son impact sur la physiologie tissulaire ainsi que sur la signalisation lipidique associée aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PAFAH1B3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pafah1b3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pafah1b3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pafah1b3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PAFAH1B3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pafah1b3 pour l'étude de la signalisation de PAFAH1B3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pafah1b3 essentiels à la fonction de PAFAH1B3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pafah1b3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PAFAH1B3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PAFAH1B3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pafah1b3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PAFAH1B3 plasmide HDR (m) et le PAFAH1B3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pafah1b3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pafah1b3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.