PACE4 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-405605-LAC-2

O PCSK6 humano codifica a convertase de proproteínas PACE4, uma serina endoprotease dependente de cálcio que processa proteínas precursoras secretadas e de superfície celular em motivos contendo resíduos básicos, gerando fatores maduros e bioativos. A PACE4 contribui para a ativação pós-traducional de fatores de crescimento, metaloproteinases, receptores e proteínas relacionadas à adesão, conectando a atividade de PCSK6 à remodelação da matriz extracelular, à migração celular e a redes de sinalização do desenvolvimento, incluindo vias associadas a TGF-β/BMP. A expressão ou atividade desregulada de PCSK6 tem sido associada a processamento proteolítico aberrante na biologia do câncer, à remodelação tecidual relacionada à fibrose e a fenótipos cardiovasculares, refletindo seu papel na regulação da sinalização parácrina e de cascatas de proteases. Assim, a perturbação de PCSK6/PACE4 é utilizada em estudos de edição gênica e genômica funcional para investigar a maturação de substratos dependente de convertases, a proteostase da via secretória e alterações subsequentes em invasão, diferenciação e saídas de sinalização inflamatória.

As Partículas de Ativação Lentivirais PACE4 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PCSK6 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PACE4 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PCSK6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PACE4. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PCSK6 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.