Plásmido Doble Nickase (h) p68 RNA Helicase: sc-402401-NIC

DDX5 codifica la helicasa de ARN p68, una helicasa de ARN dependiente de ATP de la familia DEAD-box que remodela el ARN y los complejos ribonucleoproteicos para regular el empalme (splicing) del pre-ARNm, el procesamiento de ARNr, la transcripción y la biogénesis de microARN. p68 actúa como un correceptor multifuncional de factores de transcripción y de complejos asociados a la cromatina, conectando el metabolismo del ARN con la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización de estrés. Participa en vías que controlan programas transcripcionales de la ARN polimerasa II y el control de calidad del ARN, influyendo en la diferenciación y la proliferación celulares. La desregulación de la actividad y la expresión de DDX5 se ha asociado con una señalización oncogénica alterada y con inestabilidad del transcriptoma, lo que lo convierte en un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de biología tumoral y de defectos en el procesamiento del ARN.

p68 RNA Helicase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DDX5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DDX5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DDX5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DDX5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.