Plásmido CRISPR de Activación (m) p300: sc-435902-ACT

El gen Ep300 de ratón codifica p300, un coactivador transcripcional de amplia acción y una acetiltransferasa de lisina que acetila histonas y diversos sustratos no histónicos para regular la accesibilidad de la cromatina y los programas de expresión génica. p300 integra señales de vías como TGF-β/SMAD, Wnt/β-catenina, la señalización de receptores nucleares y las respuestas a la hipoxia mediante interacciones proteína–proteína y unión a potenciadores (enhancers), moldeando decisiones de destino celular, proliferación y respuestas al estrés. La actividad de Ep300 influye en la función de enhancers y super-enhancers, en las respuestas al daño del ADN y en redes transcripcionales inflamatorias, lo que la convierte en un componente central del control epigenético del desarrollo y la homeostasis tisular. La acetilación y coactivación dependientes de p300 cuando están desreguladas se asocian con diferenciación alterada y reconfiguración transcripcional observadas en múltiples contextos biológicos relevantes para la enfermedad, incluidos modelos de cáncer y estados inflamatorios.

p300 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ep300 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

p300 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ep300 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ep300, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de p300. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ep300 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de p300 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía p300 en células tumorales con expresión de Ep300 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.